Yeast two hybridization을 이용한 podocin과 결합하는 새로운 단백질의 탐색 및 규명

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Yeast two hybridization을 이용한 podocin과 결합하는 새로운 단백질의 탐색 및 규명


[ 2007년 09월 30일 12시 51분 ]

목적

최근 단백뇨 혹은 podocyte의 변형이 관찰되는 신장의 각종 유전질환에서 유전 인자의 결함이 발견되고 있고, 이를 통해 새로운 분자 혹은 알려진 분자의 새로운 기능이 발견되고 있다. 이들 분자의 구조 및 기능에 대한 연구는 극소수의 선천적인 신장 질환뿐 아니라 podocyte의 형태 변화가 동반되는 거의 대부분의 후천적인 신장 질환의 발생과 경과의 기전을 규명하는데 매우 중요한 단서를 제공할 수 있을 것이다. 연구자들은 podocin과 결합하는단백질을 검색하고 그 성격을 규명하고자 본 연구를 수행했다.

방법

Mowse Kidney에서 얻은 podocin을 PCR을 통해 증폭시킨 다음, E.coli에 transformation해 colony를 얻었다.이를 가지고 yeast two hybridization 방법을 이용해 podocin과 결합한다고 추정되는 유전자를 screening 했다. 그런 다음, 이 유전자를 PCR, cloning하여 규명했고, 더 나아가 podocin과 in vitro상에서 translation됐는지를 확인했다.

결과

PCR, cloning을 통해 podocin construct를 확보한 후, yeast two hybridization 방법을 이용해 podocin과 결합한다고 추정되는 organic anion transporter(OAT) gene을 찾아냈다. OAT 유전자를 PCR, cloning을 통해 규명한 ㄷ음, podocin과 transporter, 이 두 plasmid를 in vitro상에서 translation 시킨 결과 두 단백질 모두 발현되는 것을 확인했다.

결론

Yeast two hybridization 방법을 이용해 podocin과 OAT가 결합한다는 것과 이들의 발현을 확인했다. 이러한 결과로부터 podocyte 내에서 두 단백질간의 상호 작용 및 이것이 신장질환에 어떠한 영향을 미치는지에 관해서 보다 깊은 연구가 필요하다고 생각된다.